ELISA實驗中如何確定樣本的稀釋倍數
在ELISA實驗中,確定血清樣本稀釋倍數的步驟如下:
獲取標準曲線范圍?
從試劑盒說明書中獲取標準曲線的濃度范圍(如0-1000pg/mL),確保樣本預測濃度落在此范圍內。
預估樣本濃度?
參考文獻或預實驗數據預估樣本濃度(如預計5000pg/mL)。
若無可參考數據,建議行小范圍預稀釋(如1:10、1:50、1:100),通過檢測OD值初步判斷濃度范圍。
計算稀釋倍數?
公式:稀釋倍數=樣本預估濃度/標準曲線上限濃度
示例:若標準曲線上限為1000pg/mL,預估濃度為5000pg/mL,則稀釋倍數為5000/1000=5倍。
驗證稀釋效果?
稀釋后檢測OD值,確保其落在標準曲線的中段(通常為OD值0.5-1.5之間),若超出需調整稀釋倍數重新檢測。
注意事項?
稀釋液需與試劑盒匹配(如說明書推薦的緩沖液)。
避免過度稀釋導致信號過低,或稀釋不足導致超出檢測范圍。
通過以上步驟,可科學確定稀釋倍數,確保檢測結果準確可靠。
注意:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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